Phos-tag SDS-PAGE データ集　53BP1

53BP1

Double-strand break (DSB) repair protein involved in response to DNA damage, telomere dynamics and class-switch recombination (CSR) during antibody genesis
Mw; 213,000

泳動結果

53BP1は高分子量(213 kDa) であるため，3％という低濃度のポリアクリルアミドゲルを用いて解析しています。
3％ではゲルが柔らかすぎて扱いにくいため，0.5％アガロースを加えて補強しています。

上段のパネルは通常のSDS-PAGE, 下段はMn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE です。

HeLa細胞を無血清で培養したのち，actinomycin(2µM)を添加して5時間後に53BP1のリン酸化状態を Mn²⁺–Phos-tag SDS-PAGEで解析しています。

Reference	Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Ujihara, H., and Koike, T. Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose. Proteomics, 9, 4098–4101 (2009) https://doi.org/10.1002/pmic.200900020 Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T. Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE. *Nature Protocols*, 9, 1513–1521 (2009) doi: 10.1038/nprot.2009.154.
ゲルの条件	Mn²⁺–Phos-tag:　20µM Polyacrylamide: 3%(w/v) + Agarose 0.5%(w/v)
検出方法	WB: anti-53BP1 anti-p53BP1(pS25/29) anti-p53BP1(pS1778)

Reference

Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Ujihara, H., and Koike, T.
Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose.
Proteomics, 9, 4098–4101 (2009)

https://doi.org/10.1002/pmic.200900020

Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T.
Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE.
Nature Protocols, 9, 1513–1521 (2009)

doi: 10.1038/nprot.2009.154.

ゲルの条件

Mn²⁺–Phos-tag:　20µM

Polyacrylamide: 3%(w/v)
+
Agarose 0.5%(w/v)

検出方法

WB:

anti-53BP1

anti-p53BP1(pS25/29)

anti-p53BP1(pS1778)