Phos-tag SDS-PAGE データ集Abltide GST kinase assay

Phos-tag SDS-PAGE データ集Abltide GST kinase assay

Abltide-GST

Recombinant fusion protein containing peptide EAIYAAPFAKKK with an N-terminal GST-tag, expressed in E. coli. Mr ~28,000

泳動結果

リコンビナントAblキナーゼによる，基質タンパク質Abltide-GST の
in vitro kinase assayです。
0〜60分の反応時間で，リン酸化された基質がシフトアップしています。

抗チロシンリン酸化抗体(PY20)によるWestern解析から，
シフトアップしたバンドが，リン酸化チロシンを含んでいることがわかります。

Mn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE では，各時間での
［リン酸化］/ ［非リン酸化］が定量的にわかることが利点です。

関連画像

阻害剤GlivecのAblキナーゼ阻害プロファイル
Abltide-GST Phosphatase assay

Reference

Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Takiyama, K., and Koike, T. Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins. Molecular & Cellular Proteomics, 5, 749-757 (2006)

DOI:10.1074/mcp.T500024-MCP200

ゲルの条件

Mn²⁺–Phos-tag:　100µM

Polyacrylamide: 10%(w/v)

検出方法

1.　CBB stain

2.　WB:　anti-pTyr antibody (clone PY20)