Phos-tag SDS-PAGE database MBP

Myelin basic protein (MBP)

Myelin basic protein (MBP, Mr = 18.4kDa) is a major component of the myelin sheath that coats
neurons of the central nervous system. MBP is a substrate for phosphorylation by several different protein kinases including MAPK, PKA, CaMIIK, PKC and phosphorylase kinase.

Image

MPAKによる，基質タンパク質MBP の in vitro kinase assayです。
0〜60分の反応時間で，リン酸化された基質がシフトアップしています。

抗リン酸化MBP抗体によるWestern解析から，シフトアップしたバンドが，リン酸化チロシンを含んでいることがわかります。

Mn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE では，各時間での
［リン酸化］/ ［非リン酸化］が定量的にわかることが利点です。

Reference	Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Takiyama, K., and Koike, T. Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins. Molecular & Cellular Proteomics, 5, 749-757 (2006) DOI:10.1074/mcp.T500024-MCP200
Composition of gel	Mn²⁺–Phos-tag:　100µM Polyacrylamide: 12.5%(w/v)
Detection	1.　CBB stain 2.　WB: anti-pMBP antibody (clone P12)

Reference

Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Takiyama, K., and Koike, T. Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins. Molecular & Cellular Proteomics, 5, 749-757 (2006)

DOI:10.1074/mcp.T500024-MCP200

Composition of gel

Mn²⁺–Phos-tag:　100µM

Polyacrylamide: 12.5%(w/v)

Detection

1.　CBB stain

2.　WB: anti-pMBP antibody (clone P12)