Phos-tag SDS-PAGE データ集 EnvZ
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OmpR

Member of the two-component regulatory system EnvZ/OmpR involved in the regulation of osmoregulation (genes ompF and ompC). EnvZ functions as a membrane-associated protein kinase that phosphorylates OmpR in response to environmental signals. Mw; 27,000

泳動結果

バクテリアの情報伝達経路には,ヒスチジンとアスパラギン酸による
リン酸基転位反応によって行われるものがあり,
二成分伝達系と言われます。

外界の環境変化を捉えるセンサーキナーゼ(ヒスチジンキナーゼHK)と
レスポンスレギュレータのペアから成ります。

センサーキナーゼのヒスチジンが自己リン酸化によってリン酸化し,
そのリン酸基がレスポンスレギュレータのアスパラギン酸に転移されます。
レスポンスレギュレータ〜は転写因子として支配下の遺伝子発現に関わります。

本実験は,E.coli の 二成分伝達系EnvZ/OmpR
のレスポンスレギュレータOmpR の in vitro kinase assayです。
OmpR はHis-tagタンパク質として発現,精製したものです

アセチルリン酸存在下で,アスパラギン酸54が反応時間0−90分で経時的にリン酸化されていく様子がわかります。

 

関連画像

E.coli EnvZ in vitro kinase assay-1

E.coli EnvZ in vitro kinase assay-2

Reference

Kinoshita-Kikuta, E.,Kusamoto, H., Ono, S., Akayama, K., Eguchi, Y., Igarashi, M., Okajima, T., Utsumi,, R., Kinoshita, E., Koike, T. Quantitative monitoring of His and Asp phosphorylation in a bacterial signaling system by using Phos-tag Magenta/Cyan fluorescent dyes. Electrophoresis, 40,3005-3013 (2019)

DOI 10.1002/elps.201900261

ゲルの条件

Zn2+–Phos-tag: 20µM

Polyacrylamide: 10%(w/v)

検出方法 CBB stain

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