Phos-tag SDS-PAGE database SHC

SHC

Signaling adapter that couples activated growth factor receptors to signaling pathways.
Mw: p66Shc= 66.000, p52Shc= 52,000, p46Shc=46,000

Image

SHC

A431細胞を上皮成長因子(EGF)で刺激した時の，細胞内の SHC のリン酸化状態を
調べています。

各時刻に，細胞をTBSで洗浄した後，RIPAバッファーに溶解し，
可溶性画分のタンパク質を電気泳動しています。

通常のSDS-PAGE では，66, 52, 46 (kDa) の3バンドが見られます。
抗リン酸化SHC抗体によるWestern解析から，
EGF刺激によって，Y239/Y240, Y317がリン酸化される様子がわかります。
66, 52 (kDa)のそれぞれは，通常のSDS-PAGE でも，
リン酸化によってシフトアップすることがわかります。

Mn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE では，EGF刺激によってバンドが増えています。
抗リン酸化SHC抗体で検出されものがリン酸化バンドです。

Related data

SHC （Zn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE）

Reference	Kinoshita-Kikuta, E., Aoki, Y., Kinoshita, E., and Koike, T. Label-free kinase profiling usingphosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis. Molecular & Cellular Proteomics, 6, 356–366 (2007) DOI:10.1074/mcp.T600044-MCP200
Composition of gel	Mn²⁺–Phos-tag:　25µM Polyacrylamide: 7.5%(w/v)
Detection	WB: anti-SHC antibody anti-pSHC (pY239/Y240)antibody anti-pSHC (pY317)antibody

Reference

Kinoshita-Kikuta, E., Aoki, Y., Kinoshita, E., and Koike, T. Label-free kinase profiling usingphosphate affinity polyacrylamide
gel electrophoresis. Molecular & Cellular Proteomics, 6, 356–366 (2007)

DOI:10.1074/mcp.T600044-MCP200

Composition of gel

Mn²⁺–Phos-tag:　25µM

Polyacrylamide: 7.5%(w/v)

Detection

WB:
anti-SHC antibody

anti-pSHC (pY239/Y240)antibody

anti-pSHC (pY317)antibody